心肌肌鈣蛋白I（cTnI）的測定方法

心肌肌鈣蛋白I（cTnI）是心肌損傷的敏感性和特異性指標，與其他檢測指標相比，cTnI在血液中出現時(shí)間早、持續時(shí)間長(cháng)。cTnI作為一項理想的心肌損傷標志物，對急性心肌梗死（AMI）、不穩定型心絞痛（UAP）等疾病的預測診斷、病情檢測、療效觀(guān)察及預后評估都具有較高的臨床價(jià)值。測定血清cTnI水平的方法有多種，本文主要介紹當下幾個(gè)比較重要的測定技術(shù)，并簡(jiǎn)要分析了其特點(diǎn)。

酶聯(lián)免疫吸附試驗測定cTnI

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是一項被廣泛用于臨床的酶標固相免疫測定技術(shù)。ELISA檢測cTnI主要方法是通過(guò)將待測血清與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的特異性抗體混合并孵育，再向包被了cTnI的微孔板中加入已經(jīng)孵育好的混合液，由于微孔板之前包被的cTnI與待測樣品中的cTnI共同競爭單抗，使得微孔板上的HRP被間接固定住，從而可通過(guò)測定被間接固定在微孔板中的HRP催化活性，與標準曲線(xiàn)對照計算得到待測血清中cTnI的濃度。目前，ELISA方法檢測cTnI已經(jīng)成熟化，適合于批量檢測。但由于血清中cTnI的含量偏低，臨床檢測需快速，而ELISA步驟較為繁瑣，測定所需時(shí)間偏長(cháng)，且靈敏度相對偏低，因而此法在cTnI檢測中的應用受到一定限制。

膠體金法測定cTnI

膠體金免疫層析技術(shù)主要通過(guò)雙抗體夾心法原理定性檢測人血清/血漿中的cTnI。在試劑卡中的纖維膜上質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）包被有羊抗鼠IgG，檢測線(xiàn)（T線(xiàn)）包被有抗cTnI單克隆抗體-2，另一端包被有抗cTnI單克隆抗體-1-膠體金復合物。檢測時(shí)，待測血清/血漿樣品首先與抗cTnI單克隆抗-1-膠體金混合，并沿纖維膜向上層析依次通過(guò)T線(xiàn)、C線(xiàn)（C線(xiàn)必須顯色，否則結果無(wú)效）。如果血清/血漿中有cTnI存在，cTnI首先和抗cTnI單克隆抗體-1-膠體金結合，形成“cTnI-抗cTnI單克隆抗體-1-膠體金復合物”，在層析至T線(xiàn)時(shí)，會(huì )被預先包被在T線(xiàn)的另一抗cTnI單克隆抗體-2捕獲。結果顯示在T線(xiàn)和C線(xiàn)處均出現一條紅色線(xiàn)條，為陽(yáng)性，表示樣品中有超出檢出靈敏度的cTnI存在，提示病人發(fā)生了心肌梗塞；若在T線(xiàn)處未形成線(xiàn)條，為陰性，表示樣品中無(wú)cTnI存在或cTnI濃度低于檢出靈敏度。膠體金法樣本用量少，簡(jiǎn)便快捷，可快速獲得診斷結果，其局限性在于結果只能初步定性分析，不能進(jìn)一步定量分析。

化學(xué)發(fā)光法測定cTnI

化學(xué)發(fā)光法測定cTnI主要分為兩類(lèi)。一類(lèi)是較為普遍應用的測定系統采用直接化學(xué)發(fā)光法，通過(guò)小分子化學(xué)發(fā)光劑吖啶酯直接標記抗原或抗體，反應洗滌后，在堿性條件下檢測其發(fā)光強度，從而檢測cTnI。另一類(lèi)測定cTnI的化學(xué)發(fā)光系統多采用酶促化學(xué)發(fā)光雙抗體一步夾心酶免疫分析法，以ALP作為標記物，用單克隆抗cTnI IgG抗體包被的磁性微粒為固相載體，檢測時(shí)樣品中的cTnI與包被在固相載體上的抗體及ALP標記的抗體形成夾心復合物，加入發(fā)光基質(zhì)底物，測定其發(fā)光強度，通過(guò)多點(diǎn)標定曲線(xiàn)計算cTnI濃度?；瘜W(xué)發(fā)光法不僅安全、靈敏，而且通用性強，但儀器成本相對ELISA法而言較高。

膠乳增強免疫比濁法測定cTnI

膠乳增強免疫比濁法測定cTnI是通過(guò)將cTnI與包被有特異性抗體的致敏膠乳顆粒結合，使相鄰的膠乳顆粒彼此交聯(lián)，測定一定波長(cháng)下溶液濁度增加的程度與標本中cTnI含量關(guān)系。該測定方法不僅特異性強，靈敏度高，重復性好，線(xiàn)性范圍寬，而且操作簡(jiǎn)便、快速，具有一定的臨床應用價(jià)值。有研究者比較了3種cTnI試劑在自動(dòng)生化分析儀分析后的性能參數，結果顯示膠乳增強免疫比濁測定cTnI具有較高的精密度和靈敏度，與化學(xué)發(fā)光免疫分析具有良好的相關(guān)性。

cTnI作為心肌損傷的一項特異性指標，已被廣泛應用于臨床診斷、風(fēng)險分層以及療效觀(guān)察等方面。有關(guān)cTnI的檢測方法也在不斷更新，除以上介紹的四種方法外，還有熒光分析法、質(zhì)譜分析法、生物傳感器法等等。在測定方法日趨完善的同時(shí)，廣大研究者更需致力于cTnI測定標準化問(wèn)題。

參考文獻

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