體外診斷試劑原料專(zhuān)題
體外診斷是醫療器械行業(yè)的一個(gè)分支。在體外診斷領(lǐng)域檢測對象、方法學(xué)和技術(shù)路線(xiàn)眾多，新技術(shù)不斷涌現，但免疫檢測的方法一直是體外診斷領(lǐng)域最重要的技術(shù)。利用抗原、抗體的特異性反應來(lái)檢測蛋白質(zhì)、激素等微量物質(zhì)，從20世紀60年代利用同位素，到20世紀80年代利用酶，再到20世紀90年代利用化學(xué)發(fā)光對檢測信號進(jìn)行放大，相關(guān)技術(shù)路線(xiàn)不斷演進(jìn)，超過(guò)了50年的歷史。最早以放射性核素作為標記物的放射免疫檢測技術(shù)是美國醫學(xué)家耶洛和柏森于1959年建立的。標記免疫檢測技術(shù)的發(fā)展極大地提高了免疫檢測方法的靈敏度，其后出現的非放射性核素如酶、元素、發(fā)光物和元素化合物標記的化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)，使免疫檢測進(jìn)入到了自動(dòng)化檢測的時(shí)代。如今，免疫檢測方法已在臨床廣泛應用于疾病篩查、診斷、治療監測及預后評估等方面。
抗體、抗原是免疫檢測試劑核心反應原材料，是體外診斷試劑質(zhì)量水平的重要決定因素，影響著(zhù)體外診斷試劑靈敏度、特異性、穩定性等各項性能。檢測特異性（assay specificity）是抗體僅對分析物產(chǎn)生可檢測性反應的能力,交叉反應性（cross-reactivity）與之相對，描述了抗體對分析物以外物質(zhì)的反應能力。在免疫計量分析法的設計中，抗體對內源性分析物的交叉反應性（cross-reactivity）評估是必不可少的。許多蛋白質(zhì)具有與高度保守的表位密切相關(guān)的結構。如果捕獲抗體或檢測抗體與交叉點(diǎn)反應物結合，則檢測結果偏低；當捕獲、檢測抗體均與交叉反應物結合時(shí)，檢測結果偏高。影響免疫檢測的因素有很多，除了抗體的交叉反應性還有：
1、抗體的物理掩蔽
抗體的物理掩蔽通常僅出現在固相抗體系統中，抗體包被在疏水聚合物為主的表面上。某些采血裝置中所用的脂質(zhì)和硅油有時(shí)會(huì )與固相產(chǎn)生非特異性結合，導致抗體物理掩蔽。
2、抗體結合位點(diǎn)構像改變
由于樣本引起的反應體系中離子強度或pH的變化，或者是由于預提取樣本時(shí)殘留的有機溶劑，抗體結合位點(diǎn)構像可能發(fā)生改變。
3、嗜異性抗體（heterophilic antibodies）
人體樣本中的抗動(dòng)物IgG抗體可能與試劑抗體發(fā)生交叉反應，特別是來(lái)自相同物種的試劑抗體，如小鼠單克隆抗體。嗜異性抗體與捕獲抗體和結合抗體的反應可形成穩定的、可檢測的抗體復合物，與分析物正常反應形式的抗體復合物類(lèi)似。
4、抗原構像的改變
許多蛋白質(zhì)含有二價(jià)離子結合位點(diǎn)，血清或EDTA血漿中存在鎂或鈣離子，在溶液中一些藥物和其他半抗原與二價(jià)陽(yáng)離子形成復合物，可能導致抗原構像改變。
5、結合態(tài)分析物的置換
在檢測游離小分子（如甲狀腺素T4或三碘甲狀腺原氨酸T3）的時(shí)，如果某些物質(zhì)能夠將結合態(tài)小分子從結合位點(diǎn)置換出來(lái)，就會(huì )干擾檢測結果。如非酯化脂肪酸在樣品儲存時(shí)，容易形成酯化脂肪酸，這類(lèi)分析物就會(huì )使激素與蛋白結合點(diǎn)脫離，從而影響檢測。
6、低劑量鉤狀效應（low-dose hook）
低劑量鉤狀效應偶爾會(huì )在競爭性檢測法中遇到，特別是在那些放射性檢測法中，其抗原被標記到一個(gè)非常高的比活性。對于低濃度分析物，抗原抗體結合可以超過(guò)零濃度時(shí)的結合。這種現象歸因于抗體對抗原的正協(xié)同結合。
7、高劑量鉤狀效應（high-dose hook）
高劑量鉤狀效應僅限于一步免疫計量分析法（夾心法），特點(diǎn)是在分析物濃度非常高時(shí)信號反而降低。這是由于分析物濃度過(guò)高，捕獲和檢測抗體同時(shí)飽和，阻止了可檢測的夾心復合物的形成。高劑量鉤狀效應主要影響捕獲抗體濃度有限的固相檢測法和分析物濃度范圍非常寬的檢測法，如腫瘤標志物的檢測。
基礎知識
性能評估
開(kāi)發(fā)技術(shù)
相關(guān)產(chǎn)品
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