體外診斷試劑性能評估基本內容
體外診斷試劑是疾病診斷與治療的重要輔助手段。一個(gè)新開(kāi)發(fā)的試劑能否真正面市，除了進(jìn)行反應模式和體系等優(yōu)化外，合理的性能分析與評估，是必經(jīng)的程序，也是質(zhì)量保障的基礎。通常，體外診斷試劑產(chǎn)品性能評估包括檢測限、線(xiàn)性范圍、可報告范圍，準確度，精密度，干擾實(shí)驗，穩定性，參考區間。
1.檢測限
檢測限是指檢測方法可檢測出的最低被檢測量濃度，也稱(chēng)為分析靈敏度。
分析靈敏度：一般用95％可信限計算：重復測定空白樣本20次，計算20次反應測得的均值（X）和標準差（SD），以X+2SD（夾心法）或X-2SD（競爭法）計算出相應的濃度，即為體外診斷試劑的分析靈敏度，也是注冊資料所需提供的內容。
功能靈敏度：將低值樣本倍比稀釋后重復測定10次以上，計算每個(gè)低值樣本檢測信號的均值、標準差和變異系數（CV），選擇CV大于 20％時(shí)所對應的低值樣本平均濃度，這就是體外診斷試劑的功能靈敏度。
2.線(xiàn)性范圍
線(xiàn)性范圍是指檢測系統最終輸出值（濃度或活性）與被分析物的濃度成正比的范圍。
建立一種定量測定方法的線(xiàn)性范圍，需在預期測定范圍內選擇7-11個(gè)濃度水平。準備足量的高值（H）樣本和低值（L）樣本，經(jīng)不同比例混合配制成中間濃度樣本，比例關(guān)系可按等間距或其他確定的比例。其中，有幾個(gè)重要的濃度水平需要考慮：1）最低分析濃度或線(xiàn)性范圍下限；2）不同的醫學(xué)決定水平值；3）最高分析濃度或線(xiàn)性范圍上限。
3.可報告范圍
可報告范圍是指對檢測有意義的待測物濃度范圍。
可報告范圍低限：以方法性能指示的CV值為可接受界值，由數據中選取CV值等于或小于可接受界值的最低濃度水平作為可報告范圍低限。
可報告范圍高限：當測定值超出線(xiàn)性范圍上限時(shí)，此測定值應視為不準確值，需要對標本進(jìn)行稀釋。由于基質(zhì)效應的影響，任何標本并非可以做無(wú)止境的稀釋。也就是說(shuō)，每一個(gè)實(shí)驗項目有其最大稀釋倍數。這個(gè)最大稀釋倍數與線(xiàn)性范圍上限的乘積即為可報告范圍高限。
4.準確度
準確度是指檢測結果與被測量真值之間的一致程度。
回收實(shí)驗：實(shí)質(zhì)上是實(shí)驗測得的加入的標準物的濃度與理論計算而來(lái)的加入標準物的濃度的比值。
方法學(xué)比對：對于比較、比對方法，采用符合生產(chǎn)廠(chǎng)家要求的實(shí)驗室現行方法，或采用工人的參考方法。比對方法應具備以上條件：1）具有比實(shí)驗樣品方法更好的精密度；2）沒(méi)有已知的干擾物；3）同實(shí)驗樣品方法具有相同單位。
5.精密度
精密度通常是指在規定條件下相互獨立的測試結果之間的一致程度。精密度的程度是用統計學(xué)方法得到的，是通過(guò)測量不精密度的數字形式表示的，例如：偏差、標準差和變異系數（CV）。
只評估批內精密度：批內精密度的測定應使用同一種類(lèi)、同一批號的試劑盒校準物（如可能，只進(jìn)行一次校準），在一批內對樣本進(jìn)行至少20次重復測定。
同時(shí)評估批內和批間精密度：每天做2個(gè)批次的測試，每批測試對同一樣品做雙份測量，工作20d。那么，評估結束時(shí)有40對數據，即80個(gè)測試結果。從同一樣本的雙份測量結果即40個(gè)數據可求出批內精密度；從兩批80個(gè)數據可求出批間精密度。
6.干擾實(shí)驗
干擾實(shí)驗主要是考慮非檢測物對檢測結果的影響，通過(guò)對樣本中添加不同種類(lèi)、不同濃度的干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測，以判斷在產(chǎn)品性能指標范圍內可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。血液樣本一般須考慮膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等常見(jiàn)干擾物質(zhì)及溶血等因素；檢測樣本為血漿的試劑，還應充分考慮不同抗凝劑對檢測結果的影響。尿液樣本則一般考慮pH值、血尿、蛋白尿等的影響。
7.穩定性
穩定性是體外診斷試劑隨時(shí)間推移保持特性一致性的能力。
效期穩定性研究時(shí)間設定一般原則是“第一年內每隔三個(gè)月檢測一次，第二年內每隔六個(gè)月檢測一次，第三年開(kāi)始可以每年檢測一次。如果有效期為一年或一年以?xún)?，則長(cháng)期穩定性應為前三個(gè)月每月檢測一次，以后每三個(gè)月一次”。
加速穩定性研究方法為：將三個(gè)批號的試劑盒放 入37?C恒溫培養箱中，分別于第0、3、6、10天各取原裝未開(kāi)封試劑，參考產(chǎn)品技術(shù)要求中相關(guān)檢測方法對產(chǎn)品進(jìn)行檢測，各指標均應符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標要求。
運輸穩定性評價(jià)是基于對試劑實(shí)際運輸條件的了解（如運輸時(shí)間、預計溫度和濕度）來(lái)模擬運輸條件存放產(chǎn)品從而評價(jià)產(chǎn)品的穩定性。在運輸穩定性考察中主要考慮的條件有：極端溫度條件，溫度循環(huán)條件，沖擊與振蕩，壓力與濕度等。生產(chǎn)企業(yè)可以通過(guò)實(shí)地追蹤記錄體外診斷試劑產(chǎn)品的物流運輸情況為模擬運輸 模式的確定提供參考。
開(kāi)瓶穩定性是考察試劑在正常使用條件下，外界因素對試劑性能指標的影響。由于試劑、試紙條等在開(kāi)封后會(huì ) 與空氣接觸產(chǎn)生氧化、降解等反應，部分試劑在開(kāi)瓶上機后的外界條件與原儲存條件差別很大，以及部分試劑還會(huì )存在使用者二次配制等情況，所以在制定開(kāi)封穩定性研究方法時(shí)應充分考慮到各種環(huán)境因素。
8.參考區間
參考區間即正常人群的檢測值范圍，在研究過(guò)程中，企業(yè)應詳細說(shuō)明所采用樣本來(lái)源及試驗方法，并明確參考人群的篩選標準。根據文獻資料等判斷檢測結果在不同性別、年齡、樣本類(lèi)型之問(wèn)是否有顯著(zhù)性差異，如有須分別進(jìn)行研究，同時(shí)所研究樣本例數應符合統計學(xué)要求，建議采用至少120例以上樣本進(jìn)行研究(可滿(mǎn)足90％置信限)，198例樣本則可滿(mǎn)足99％的置信限，在檢測結果統計分析過(guò)程中，結合不同產(chǎn)品的臨床意義確定最終的參考區間，在研究過(guò)程中由于所選樣本受地區或人種限制，因此在臨床應用時(shí)建議各臨床實(shí)驗室建立參考區間。
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